रसायन विज्ञान में, स्पेक्ट्रोफोटोमेट्री तरंग दैर्ध्य के एक समारोह के रूप में सामग्री के प्रतिबिंब या संचरण गुणों का मात्रात्मक माप है। यह उस स्पेक्ट्रोफोटोमिट्री में सामान्य शब्द इलेक्ट्रोमैग्नेटिक स्पेक्ट्रोस्कोपी से अधिक विशिष्ट है, जो दृश्य प्रकाश, निकट-पराबैंगनी, और निकट-अवरक्त से संबंधित होता है, लेकिन समय-सुलझाई स्पेक्ट्रोस्कोपिक तकनीकों को शामिल नहीं करता है

अवलोकन
स्पेक्ट्रोफोटोमेट्री एक ऐसा उपकरण है जो अणुओं के मात्रात्मक विश्लेषण पर निर्भर करता है जो रंगीन यौगिकों द्वारा कितना प्रकाश अवशोषित होता है। स्पेक्ट्रोफोटोमेट्री, स्पेक्ट्रोफोटोमीटर के रूप में जाने वाले फोटोमीटर का उपयोग करता है, जो अपने रंग (वेवलेंथ) के फ़ंक्शन के रूप में एक प्रकाश की बीम की तीव्रता को माप सकता है। स्पेक्ट्रोफोटोमीटर की महत्वपूर्ण विशेषताएं वर्णक्रमीय बैंडविड्थ (रंगों की श्रेणी जो इसे टेस्ट नमूने के माध्यम से संचारित कर सकती हैं), नमूना-प्रेषण का प्रतिशत, नमूना-अवशोषण की लॉगरिदमिक श्रेणी और कभी-कभी परावर्तन माप का प्रतिशत।

एक स्पेक्ट्रोफोटोमीटर सामान्यतः ट्रांसमिटेशन की माप या समाधान के प्रतिबिंब, पारदर्शी या अपारदर्शी ठोस पदार्थों, जैसे पॉलिश ग्लास या गैसों के लिए उपयोग किया जाता है। हालांकि कई जैव रसायनों रंगीन हैं, वे दृश्य प्रकाश को अवशोषित करते हैं और इसलिए रंगीनेटिक प्रक्रियाओं द्वारा मापा जा सकता है, यहां तक ​​कि रंगहीन जैव रसायनों को अक्सर रंगीन यौगिकों में परिवर्तित किया जा सकता है जो कि क्रोमोजेनिक रंग बनाने वाली प्रतिक्रियाओं के लिए उपयुक्त होता है ताकि रंगिमाइटरिक विश्लेषण के लिए उपयुक्त यौगिकों को प्राप्त किया जा सके। हालांकि, इन्हें किसी भी सूचीबद्ध प्रकाश सीमाओं पर फैलता मापने के लिए डिज़ाइन किया जा सकता है जो आमतौर पर 200 एनएम -200 एनएम विभिन्न नियंत्रणों और कैलिब्रेशनों का उपयोग करते हैं। प्रकाश की इन श्रेणियों के भीतर, मानकों का उपयोग करके मशीन पर कैलिब्रेशन की आवश्यकता होती है जो कि फ़्रेमैटिक दृढ़ संकल्प के तरंग दैर्ध्य के आधार पर भिन्न होती है।

एक ऐसे प्रयोग का उदाहरण जिसमें spectrophotometry का उपयोग किया जाता है एक समाधान के स्थिर संतुलन का निर्धारण होता है। एक समाधान के भीतर एक निश्चित रासायनिक प्रतिक्रिया आगे और पीछे की दिशा में हो सकती है, जहां रिएक्टेंट उत्पादों और उत्पादों को रिएक्टेंट्स में तोड़ते हैं। कुछ बिंदु पर, यह रासायनिक प्रतिक्रिया संतुलन के एक बिंदु तक पहुंच जाएगी जिसे एक संतुलन बिंदु कहा जाता है। इस बिंदु पर रिएक्टेंट्स और उत्पादों के संबंधित सांद्रता को निर्धारित करने के लिए, समाधान की प्रकाश संप्रेषण स्पेक्ट्रोफोटोमेट्री का उपयोग करके परीक्षण किया जा सकता है। समाधान के माध्यम से गुजरने वाले प्रकाश की मात्रा कुछ रसायनों की एकाग्रता का संकेत है जो प्रकाश को पारित करने की अनुमति नहीं देते हैं।

प्रकाश का अवशोषण अणुओं के इलेक्ट्रॉनिक और कंपन स्थितियों के साथ प्रकाश के संपर्क के कारण होता है। प्रत्येक प्रकार के अणु में उसके रासायनिक बांड और नाभिक के मेकअप के साथ जुड़े ऊर्जा स्तर का एक अलग सेट होता है, और इस प्रकार विशिष्ट तरंग दैर्ध्य या ऊर्जा के प्रकाश को अवशोषित करता है, जिसके परिणामस्वरूप अद्वितीय वर्णक्रमीय गुण होते हैं। यह अपने विशिष्ट और विशिष्ट श्रृंगार पर आधारित है।

स्पेक्ट्रोफोटोमीटर के उपयोग में विभिन्न वैज्ञानिक क्षेत्रों, जैसे भौतिकी, सामग्री विज्ञान, रसायन विज्ञान, जैव रसायन, और आणविक जीव विज्ञान का विस्तार होता है। वे रासायनिक उद्योगों के अध्ययन के लिए प्रयोगशालाओं में अर्धचालक, लेजर और ऑप्टिकल विनिर्माण, मुद्रण और फोरेंसिक परीक्षा सहित कई उद्योगों में व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है। स्पेक्ट्रोफोटोमेट्री अक्सर एंजाइम की गतिविधियों के माप, प्रोटीन सांद्रता के निर्धारण, एंजाइमिक कैनेटीक्स स्थिरांक के निर्धारण, और लिगंड बाध्यकारी प्रतिक्रियाओं के माप में उपयोग किया जाता है। आखिरकार, स्पेक्ट्रोफोटोमीटर नियंत्रण या अंशांकन के आधार पर निर्धारित करने में सक्षम होता है, कौन सा पदार्थ एक लक्ष्य में मौजूद होते हैं और देखे हुए तरंग दैर्ध्य की गणनाओं के माध्यम से कितना भी मौजूद होते हैं।

खगोल विज्ञान में, स्पेक्ट्रोफोटोमेट्री शब्द का अर्थ दिव्य वस्तु के स्पेक्ट्रम के माप को दर्शाता है जिसमें स्पेक्ट्रम के फ्लक्स स्केल को तरंग दैर्ध्य के एक समारोह के रूप में कैलिब्रेट किया जाता है, आमतौर पर एक स्पेक्ट्रोफोटोमेट्रिक मानक तारा के अवलोकन के साथ, और अवशोषण के लिए सही किया जाता है पृथ्वी के वायुमंडल द्वारा प्रकाश की।

इतिहास
1 9 40 तक बाजार पर कई स्पेक्ट्रोफोटोमीटर उपलब्ध थे, लेकिन प्रारंभिक मॉडल पराबैंगनी में काम नहीं कर सके। अर्नोल्ड ओ बेकमन ने राष्ट्रीय तकनीकी प्रयोगशालाओं कंपनी में एक बेहतर संस्करण विकसित किया, बाद में बेकमन इंस्ट्रूमेंट कंपनी और अंत में बेकमन कोल्टर मॉडल ए, बी और सी को विकसित किया गया (मॉडल सी की तीन इकाइयां तैयार की गईं), फिर मॉडल डी, जो डीयू बन गए थे सभी इलेक्ट्रॉनिक्स उपकरण के मामले में समाहित हुए थे, और इसमें पराबैंगनी सातत्य के साथ एक नया हाइड्रोजन लैंप था, और एक बेहतर मोनोक्रोमेटर। यह साधन 1 9 41 से 1 9 76 तक अनिवार्य रूप से एक ही डिजाइन के साथ बनाया गया था; 30,000 से अधिक बेचा गया 1941 की कीमत 723 अमेरिकी डॉलर थी (दूर-यूवी सहायक उपकरण अतिरिक्त लागत पर एक विकल्प थे) नोबेल रसायन शास्त्र पुरस्कार विजेता ब्रूस मेर्रिफिल्ड ने कहा कि यह “शायद जीव विज्ञान की उन्नति के लिए विकसित सबसे महत्वपूर्ण साधन था।”

डिज़ाइन
उपकरणों के दो प्रमुख वर्ग हैं: सिंगल बीम और डबल बीम। एक डबल किरण स्पेक्ट्रोफोटोमीटर दो प्रकाश पथ के बीच प्रकाश की तीव्रता की तुलना करता है, एक पथ जिसमें एक संदर्भ नमूना होता है और दूसरा परीक्षण नमूना है। एकमात्र किरण स्पेक्ट्रोफोटोमीटर एक परीक्षण नमूना डाले जाने से पहले और बाद में बीम की सापेक्ष हल्की तीव्रता को मापता है। हालांकि डबल बीम उपकरणों की तुलना माप आसान और अधिक स्थिर है, एकल-बीम उपकरणों में एक बड़ी गतिशील रेंज हो सकती है और ऑप्टिकली सरल और अधिक कॉम्पैक्ट हो सकती है। इसके अतिरिक्त, कुछ विशेष वाद्ययंत्र, जैसे कि सूक्ष्मदर्शी या दूरबीन पर निर्मित स्पेक्ट्रोफोटोमीटर, व्यावहारिकता के कारण एकल-बीम उपकरण हैं।

ऐतिहासिक रूप से, स्पेक्ट्रोफोटोमीटर विश्लेषणात्मक स्पेक्ट्रम का उत्पादन करने के लिए एक विवर्तन झंझट वाले एक मोनोक्रोमेटर का उपयोग करते हैं। झंझट या तो चल या स्थिर हो सकता है। यदि एक एकल डिटेक्टर, जैसे कि फोटोटल्टिपलर ट्यूब या फोटोडिओड का उपयोग किया जाता है, तो झंझरी को स्टेपवर्थ स्कैन किया जा सकता है ताकि डिटेक्टर प्रत्येक तरंगलांबि (जो प्रत्येक “चरण” के अनुरूप होगा) पर हल्की तीव्रता को माप सकता है। डिटेक्टरों के एरे, जैसे चार्ज युग्मित डिवाइसेस (सीसीडी) या फोटोडिड एरे (पीडीए) का इस्तेमाल भी किया जा सकता है। ऐसी प्रणालियों में, झंझरी तय हो गई है और प्रकाश की प्रत्येक तरंग दैर्ध्य की तीव्रता सरणी में एक अलग डिटेक्टर द्वारा मापा जाता है। इसके अतिरिक्त, आधुनिक मध्य-अवरक्त स्पेक्ट्रोफोटोमीटर वर्णक्रमीय जानकारी प्राप्त करने के लिए फूरियर रूपांतरण तकनीक का इस्तेमाल करते हैं। इस तकनीक को फूरियर कनवर्टर अवरक्त स्पेक्ट्रोस्कोपी कहा जाता है।

संचरण माप बनाने के दौरान, स्पेक्ट्रोफोटोम मात्रात्मक रूप से एक संदर्भ समाधान और एक परीक्षण समाधान के माध्यम से गुजरती प्रकाश के अंश की तुलना करता है, फिर इलेक्ट्रॉनिक दो संकेतों की तीव्रता की तुलना करती है और संदर्भ मानक की तुलना में नमूने के संचरण के प्रतिशत की गणना करती है। प्रतिबिंबित माप के लिए, स्पेक्ट्रोमोमीटर मात्रात्मक रूप से प्रकाश के अंश की तुलना करता है जो संदर्भ और परीक्षण के नमूने से दर्शाता है। स्रोत लैंप से प्रकाश एक मोनोक्रोमेटर के माध्यम से पारित किया जाता है, जो एक घूर्णन प्रिज्म के माध्यम से तरंग दैर्ध्यों के “इंद्रधनुष” में प्रकाश को फैलता है और मोनोक्रोमेटर के आउटपुट पक्ष पर मैकेनिकल स्लेट के माध्यम से इस फैले हुए स्पेक्ट्रम के संकीर्ण बैंडविड्थ को आउटपुट करता है। ये बैंडविड्थ परीक्षण नमूने के माध्यम से प्रेषित होते हैं। फिर प्रसारित या परावर्ती प्रकाश की फोटॉन फ्लक्स घनत्व (सामान्य रूप से मोटे तौर पर मीटर प्रति वाट) एक फोटोोडिड, चार्ज युग्मित डिवाइस या अन्य प्रकाश संवेदक से मापा जाता है। परीक्षण नमूने के प्रत्येक तरंग दैर्ध्य के लिए संप्रेषण या परावर्तन मूल्य तब संदर्भ नमूने से संचरण या प्रतिबिंबित मूल्यों के साथ तुलना की जाती है। नमूने के ‘अवशोषण’ की गणना करने के लिए अधिकांश यंत्र रैखिक संप्रेषण अनुपात के लिए लॉगरिदमिक फ़ंक्शन को लागू करेंगे, एक मूल्य जो रासायनिक के ‘एकाग्रता’ के अनुपात में मापा जाता है

संक्षेप में, एक आधुनिक स्पेक्ट्रोफोटोमीटर में घटनाओं का क्रम इस प्रकार है:

प्रकाश स्रोत एक मोनोक्रोमेटर में चमक रहा है, इंद्रधनुष में फैला हुआ है, और दो बीम में विभाजित है यह तब नमूना और संदर्भ समाधान के माध्यम से स्कैन किया जाता है।
घटना की तरंग दैर्ध्य के अंश, नमूने और संदर्भ से, या इससे परावर्तित होते हैं।
परिणामस्वरूप हल्का प्रकाशक photodetector डिवाइस पर हमला करता है, जो दो बीम की सापेक्ष तीव्रता की तुलना करता है।
इलेक्ट्रॉनिक सर्किट सापेक्ष धाराओं को रैखिक संचरण प्रतिशत और / या शोषक / एकाग्रता मूल्यों में परिवर्तित करते हैं।
कई बड़े स्पेक्ट्रोफोटोमीटर को डिटैक्टर पर दो बीमों के अशक्त वर्तमान उत्पादन को संतुलित करने के लिए, “शून्यिंग” के रूप में जाना जाने वाली एक प्रक्रिया द्वारा कैलिब्रेट किया जाना चाहिए। एक संदर्भ पदार्थ का संचरण एक बेसलाइन (डेटाम) मान के रूप में सेट किया गया है, इसलिए सभी अन्य पदार्थों के संचरण को प्रारंभिक “शून्यकृत” पदार्थ के सापेक्ष दर्ज किया गया है। स्पेक्ट्रोफोटोमीटर तब संचरण अनुपात को ‘अवशोषण’ में परिवर्तित करता है, प्रारंभिक पदार्थ के सापेक्ष परीक्षण नमूने के विशिष्ट घटकों की एकाग्रता।

जैव रसायन में आवेदन
स्पेक्ट्रोफोटोमेट्री एक महत्वपूर्ण तकनीक है जिसका इस्तेमाल कई जैव रासायनिक प्रयोगों में किया गया है जिसमें डीएनए, आरएनए, और प्रोटीन अलगाव, एंजाइम कैनेटीक्स और जैव रासायनिक विश्लेषण शामिल हैं। स्पेक्ट्रोफोटोमेट्री की प्रक्रिया का एक संक्षिप्त विवरण में एक रिक्त नमूना के अवशोषण की तुलना करना शामिल है जिसमें एक रंगीन परिसर शामिल नहीं होता है जिसमें एक रंगीन परिसर होता है यह रंग या तो एक डाई द्वारा पूरा किया जा सकता है जैसे कि कॉमेसी ब्रिलियंट ब्लू जी -50 डाई 595 एनएम पर मापा जाता है या 420 एनएम पर मापा गया एनएपीजी (पीला नमूना पीला) के बीच में देखा गया एनएजीजी के रूप में एनजीइमैटिक प्रतिक्रिया से। स्पेक्ट्रोफोटोमीटर का उपयोग प्रकाश के दृश्य क्षेत्र (350 एनएम और 800 एनएम) के बीच रंगीन यौगिकों को मापने के लिए किया जाता है, इस प्रकार इसका अध्ययन किया जा रहा पदार्थ के बारे में अधिक जानकारी प्राप्त करने के लिए किया जा सकता है। जैव रासायनिक प्रयोगों में, एक रासायनिक और / या भौतिक संपत्ति चुना जाता है और प्रयोग की जाने वाली प्रक्रिया नमूने के बारे में अधिक जानकारी प्राप्त करने के लिए उस संपत्ति के लिए विशिष्ट होती है, जैसे कि मात्रा, शुद्धता, एंजाइम गतिविधि आदि। स्पेक्ट्रोफोटोमेट्री का इस्तेमाल किया जा सकता है नमूने के अवशोषण के लिए इष्टतम पीएच का निर्धारण, अज्ञात नमूनों की सांद्रता का निर्धारण, और विभिन्न नमूनों के पीकेए का निर्धारण करने के लिए नमूने के इष्टतम तरंग दैर्ध्य अवशोषण का निर्धारण करने के लिए कई तकनीकों के लिए। स्पेक्ट्रोफोटोमेट्री प्रोटीन शुद्धि के लिए एक सहायक प्रक्रिया भी है और इसे एक परिसर के ऑप्टिकल एन्लेस बनाने के लिए एक विधि के रूप में भी इस्तेमाल किया जा सकता है। स्पेक्ट्रोफोटोमेट्रिक डेटा का उपयोग बीयर-लैम्बर्ट समीकरण, ए = -log10T = εcl = OD के साथ संयोजन के रूप में किया जा सकता है ताकि ट्रांसमिशन और एकाग्रता और शोषक और एकाग्रता के बीच विभिन्न संबंधों को निर्धारित किया जा सके। क्योंकि एक स्पेक्ट्रोफोटोमीटर अपने रंग के माध्यम से एक यौगिक के तरंग दैर्ध्य को मापता है, एक डाई बाध्यकारी पदार्थ जोड़ा जा सकता है ताकि यह एक रंग परिवर्तन कर सकता है और मापा जा सकता है। प्रत्येक घटक के मानक समाधान के अवशोषण स्पेक्ट्रा का उपयोग करके दो घटक मिश्रण की सांद्रता जानना संभव है। ऐसा करने के लिए, इस मिश्रण के विलुप्त होने के गुणांक को दो तरंगों की लंबाई और समाधान के विलुप्त होने के गुणांक को जानना जरूरी है जिसमें दो घटकों के ज्ञात भार शामिल हैं। दशकों में स्पेक्ट्रोफोटोमीटर विकसित और सुधार हुए हैं और कैमिस्टर्स के बीच व्यापक रूप से उपयोग किया गया है। इसके अतिरिक्त, स्पेक्ट्रोफोटोमीटर यूवी या विज़ुअल लाइट तरंग दैर्ध्य शोषक मूल्यों को मापने के लिए विशेष हैं। इसे एक बेहद सटीक साधन माना जाता है जो कि बहुत संवेदनशील है और इसलिए विशेष रूप से रंग परिवर्तन का निर्धारण करने में बहुत सटीक है। प्रयोगशाला प्रयोगों में उपयोग के लिए यह विधि भी सुविधाजनक है क्योंकि यह एक सस्ती और अपेक्षाकृत सरल प्रक्रिया है

यूवी-विज़ुअल स्पेक्ट्रोफोटोमेट्री
अधिकांश स्पेक्ट्रोफोटोमीटर का उपयोग स्पेक्ट्रम के यूवी और दृश्यमान क्षेत्रों में किया जाता है, और इनमें से कुछ उपकरण निकट-अवरक्त क्षेत्र में भी काम करते हैं। ट्रिप्टोफैन, टाइरोसिन और फेनिलएलैनिन की उपस्थिति के कारण 280 एनएम पर ओडी को मापने के द्वारा प्रोटीन की एकाग्रता का अनुमान लगाया जा सकता है। यह विधि बहुत सटीक नहीं है क्योंकि प्रोटीन की संरचना बहुत भिन्न होती है और इन अमीनो एसिड में से कोई भी 280 एनएम पर अधिकतम अवशोषण नहीं करता है। न्यूक्लिक एसिड प्रदूषण भी हस्तक्षेप कर सकता है। इस विधि को क्वार्ट्ज क्यूवेट्स के साथ यूवी क्षेत्र में मापने के लिए एक स्पेक्ट्रोफोटोमीटर की आवश्यकता होती है।

अल्ट्रावियोलेट-दृश्य (यूवी-विज़) स्पेक्ट्रोस्कोपी में ऊर्जा के स्तर शामिल हैं जो इलेक्ट्रॉनिक संक्रमण को उत्तेजित करते हैं। यूवी-विज़ प्रकाश का अवशोषण उन अणुओं को उत्तेजित करता है जो उनके उत्साहित-राज्यों के लिए भू-राज्यों में हैं

दर्शनीय क्षेत्र 400-700 एनएम स्पेक्ट्रोफोटोमेट्री बड़े पैमाने पर रंगिमेट्री विज्ञान में उपयोग किया जाता है। यह एक ज्ञात तथ्य है कि यह 0.2-0.8 ओडी इंक निर्माताओं, छपाई कंपनियों, वस्त्र विक्रेताओं, और बहुत से अधिक की श्रेणी में काम करता है, रंगिमेट्री के माध्यम से प्रदान किए गए डेटा की आवश्यकता है। वे दृश्य क्षेत्र के साथ हर 5-20 नैनोमीटर के क्षेत्र में रीडिंग लेते हैं, और वैकल्पिक प्रस्तुतियों के लिए एक वर्णक्रमीय परावर्तन वक्र या एक डेटा स्ट्रीम का उत्पादन करते हैं। ये घटता रंगरेटर के एक नए बैच को जांचने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है ताकि यह विशिष्टता के लिए मैच बना सके, जैसे आईएसओ मुद्रण मानकों।

परंपरागत दृश्यमान क्षेत्र स्पेक्ट्रोफोटोमीटर पता नहीं लगा सकते कि रंग या बेस सामग्री में प्रतिदीप्ति क्या है। इससे रंग के मुद्दों को प्रबंधित करना मुश्किल हो सकता है यदि उदाहरण के लिए एक या अधिक मुद्रण स्याही फ्लोरोसेंट हैं जहां एक रंगीन प्रतिदीप्ति होता है, एक द्वि-स्पेक्ट्रल फ्लोरोसेंट स्पेक्ट्रोफोटोमीटर का उपयोग किया जाता है। दृश्य स्पेक्ट्रम स्पेक्ट्रोफोटोमीटर, डी / 8 (गोलाकार) और 0/45 के लिए दो प्रमुख सेटअप हैं। नाम प्रकाश स्रोत, पर्यवेक्षक और माप कक्ष के आंतरिक के ज्यामिति के कारण होते हैं। वैज्ञानिक एक नमूने में यौगिकों की मात्रा को मापने के लिए इस उपकरण का उपयोग करते हैं। यदि यौगिक अधिक ध्यान केंद्रित अधिक प्रकाश नमूना द्वारा अवशोषित हो जाएगा; छोटी श्रेणियों के भीतर, बीयर-लैम्बर्ट कानून रखता है और नमूने के बीच अवशोषण एकाग्रता के साथ रैखिक रूप से भिन्न होता है। छपाई माप के मामले में पेपर स्टॉक के भीतर यूवी ब्राइटनर्स के प्रभाव को नियंत्रित करने के लिए दो वैकल्पिक सेटिंग्स आमतौर पर यूवी फिल्टर के बिना / बिना इस्तेमाल किए जाते हैं।

नमूने आमतौर पर cuvettes में तैयार हैं; ब्याज के क्षेत्र के आधार पर, वे कांच, प्लास्टिक (ब्याज के दृश्यमान स्पेक्ट्रम क्षेत्र) या क्वार्ट्ज (ब्याज की सुदूर यूवी स्पेक्ट्रम क्षेत्र) का निर्माण किया जा सकता है।

अनुप्रयोगों
घुलित कार्बनिक कार्बन एकाग्रता का अनुमान
Aromaticity के मीट्रिक के लिए विशिष्ट पराबैंगनी शोषक
पेंटोस की एकाग्रता के लिए बायल का परीक्षण
प्रायोगिक अनुप्रयोग
जैसा कि अनुप्रयोग अनुभाग में वर्णित है, स्पेक्ट्रोफोटोमेट्री का उपयोग डीएनए, आरएनए और प्रोटीन के गुणात्मक और मात्रात्मक विश्लेषण दोनों में किया जा सकता है। क्वालिटेटिव विश्लेषण का इस्तेमाल किया जा सकता है और स्पेक्ट्रोफोटोमीटर का इस्तेमाल व्यापक तरंग दैर्ध्य क्षेत्रों के स्कैनिंग द्वारा यौगिकों के स्पेक्ट्रा को रिकॉर्ड करने के लिए किया जाता है ताकि वे प्रत्येक तरंग दैर्ध्य पर अवशोषित गुण (रंग की तीव्रता) को निर्धारित कर सकें। एक प्रयोग जो दिखाए गए स्पेक्ट्रोफोटोमेट्री के विभिन्न उपयोगों का प्रदर्शन कर सकता है, यह विभिन्न प्रोटीन के मिश्रण से β-galactosidase की जुदाई है। बड़े पैमाने पर, स्पेक्ट्रोफोटोमेट्री का उपयोग सबसे अच्छा करने के लिए शुद्धिकरण की मात्रा को मापने में मदद के लिए किया जाता है, जो आपके नमूने की कुल प्रोटीन एकाग्रता से संबंधित है। एक आत्मीयता क्रोमैटोग्राफी चलाकर, आप बी-गैलेक्टोसाइडस को अलग कर सकते हैं और यह ओएनपीजी के साथ एकत्र किए गए नमूनों पर प्रतिक्रिया करके और यह निर्धारित करने के लिए कि क्या नमूना पीला हो जाता है, इसका परीक्षण किया जा सकता है। इस परीक्षण के बाद 420 एनएमपी पर ओएनपीजी के साथ विशिष्ट संपर्क के लिए नमूना और 595 में ब्रैडफोर्ड परख के लिए शुद्धिकरण की मात्रा का मात्रात्मक मूल्यांकन किया जा सकता है। इस स्पेक्ट्रोफोटोमेट्री के अलावा अन्य प्रोटीन नमूनों को शुद्ध और अलगाव करने के लिए एसडीएस-पेज इलैक्ट्रोफोरेसीस जैसे अन्य तकनीकों के साथ प्रयोग किया जा सकता है।

आईआर स्पेक्ट्रोफोटोमेट्री
उस क्षेत्र में माप की तकनीकी आवश्यकताओं के कारण इन्फ्रारेड क्षेत्र के लिए डिज़ाइन किए गए स्पेक्ट्रोफोटोमीटर काफी अलग हैं। एक प्रमुख कारक विभिन्न प्रकार के स्पेक्ट्रल क्षेत्रों के लिए उपलब्ध हैं, लेकिन अवरक्त माप भी चुनौतीपूर्ण हैं क्योंकि वस्तुतः सब कुछ आईआर प्रकाश को थर्मल विकिरण के रूप में उत्सर्जित करता है, खासकर 5 माइक्रोन से तरंग दैर्ध्य पर।

एक और जटिलता यह है कि ग्लास और प्लास्टिक जैसी कुछ सामग्रियां अवरक्त प्रकाश को अवशोषित करती हैं, जिससे ऑप्टिकल माध्यम के रूप में इसे असंगत बनाते हैं। आदर्श ऑप्टिकल सामग्री लवण हैं, जो दृढ़ता से अवशोषित नहीं करते हैं आईआर स्पेक्ट्रोफोटोमेट्री के नमूनों को पोटेशियम ब्रोमाइड या जमीन के दो डिस्क्स पोटेशियम ब्रोमाइड के साथ मिलाकर एक गोली में दबाया जा सकता है। जहां जलीय समाधानों को मापा जाना है, सेल बनाने के लिए अघुलनशील चांदी क्लोराइड का उपयोग किया जाता है।

spectroradiometers
स्पेक्ट्रोराडियोमीटर, जो दृश्य क्षेत्र स्पेक्ट्रोफोटोमीटर की तरह लगभग काम करते हैं, को प्रकाशकों के वर्णक्रमीय घनत्व को मापने के लिए डिज़ाइन किया गया है। अनुप्रयोगों में निर्माता द्वारा बिक्री के लिए प्रकाश व्यवस्था के मूल्यांकन और वर्गीकरण शामिल हो सकते हैं, या ग्राहकों के लिए दी जाने वाली दीपक की पुष्टि कर सकते हैं जो उनके विनिर्देशों के भीतर है। अवयव:

प्रकाश स्रोत नमूने पर या उसके माध्यम से चमकता है
नमूना प्रकाश को दर्शाता है या प्रतिबिंबित करता है
डिटेक्टर पता लगाता है कि नमूना के माध्यम से कितना प्रकाश दिखाई देता है या संचारित होता है।
तब डिटेक्टर यह निर्धारित करता है कि कितना प्रकाश नमूना संचारित या एक संख्या में परिलक्षित होता है।